测定核苷酸在核酸分子中排列次序的方法。遗传信息是以核苷酸不同的排列方式储存在DNA中，然后再通过信使RNA翻译成蛋白质，从而表现出各种生物性状。因此，DNA和RNA的核苷酸序列分析是在分子水平上研究生物的结构和功能的重要方法之一。

1965年霍利(R.W.Holley)首先测定了酵母丙氨酸tRNA的核苷酸序列(76核苷酸长)，1977年分别由桑格(F.Sanger)和吉尔伯特(W.Gilbert)发明的DNA序列测定方法是核苷酸序列测定方法的重大突破。

图 1 DNA序列测定步骤示意图

桑格的方法称为末端终止法。在这个方法中通常把要测定的DNA片段用重组DNA技术接在病毒M13载体上，让病毒产生带待测的DNA片段的单链 DNA模板。首先把模板和 ......